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腔腸素及其衍生物

腔腸素f 產品描述:

    腔腸素(Coelenterazine)是來自海腎(Renilla)、水母(Aequorea)和其它海洋生物的螢光素酶,通常用作真核細胞表達分析的細胞現象的指示劑或報告蛋白。海腎螢光素酶經常被用作轉錄調控的報告子,而水母蛋白(apoaequorin)經常被用作鈣指示劑。腔腸素的其它應用還包括在細胞或組織中用化學發(fā)光法檢測活性氧簇(Reactive Oxygen Species, ROS)。

腔腸素f推薦的緩沖溶液:

Dulbecco's Phosphate Buffered Saline (D-PBS) ,包括: CaCl2 (0.1 g/L),MgCl2?6H2O(0.1 g/L) 和

含有蛋白酶抑制劑 Aprotinin (2 μg/mL) 的D-Glucose (1 g/L)。

實驗步驟:

1. 用以上緩沖溶液制備20× 的腔腸素稀釋液 (50 μM) 。

2. 在96- 或 384-孔的微孔板上,將40μL的細胞懸浮到緩沖溶液中。每個孔中加入2,000 ~100,000 個細胞。

a. 用5 μL的測試試劑刺激細胞。

b. 加入5 μL 稀釋的腔腸素到每個孔中,最終濃度是5 μM。

c. 用 Fusion Universal Microplate Analyzer 讀取熒光數值。